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Other important steps that are key to an unbiased and successful measurement of allodynia are ensuring that the tester is always blinded to the identity of the treatment, the same tester is responsible for measurement of all time-points in the experiment, utilization of similar testing times during the day, housing conditions of the mice and ensuring standardized conditions both within time-points in an experiment as well as between experiments.

The murine infection model has a number of limitations that need to be carefully considered during more info interpretation.

Bacteria instilled intraurethrally have the capability of infecting the bladder as well as the prostate.

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We utilized a previously described intraurethral infection method 6 to deliver a clinical strain of UPEC into male mice thereby establishing an ascending infection of the prostate. Here, we describe our protocols for standardizing the bacterial inoculum 7 as well as the procedure here catheterizing anesthetized male mice prostatite una settimana di cipro y instillation of bacteria.

Behavior testing was based on the concept of cutaneous hyperalgesia resulting from referred visceral pain An irritable focus in visceral tissues reduces cutaneous pain thresholds allowing for an exaggerated response to normally non-painful stimuli allodynia.

Application of normal force to the skin result in abnormal responses that tend to increase with the intensity of the underlying visceral pain. Mice were tested prior to infection baseline and on days 3, 7, 14, 21 and 28 after infection. Referred hyperalgesia and tactile prostatite una settimana di cipro y was tested using von Frey filaments applied to the abdomen 11,12 and the plantar region of the hind paw Testing was perfomed at a fixed time-of-day, standard methodology and single experimenter testing of all animals were employed.

Blinded testing of groups was utilized to combat the limitations of behavior-based pain testing in animal models. Five individual von Frey filaments with forces of 0.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian. Male mice 5 to 7 weeks old were instilled with saline or bacteria into the urethra Figure 1. Bacterial infection resulted in no changes in tactile sensitivity of the plantar region of the hind paw data not shown.

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Figure 1. Experimental flow chart.

Measurement of Tactile Allodynia in a Murine Model of Bacterial Prostatitis

Resulting tactile allodynia was quantified using von Frey filaments with forces of. Figure 2. Methodology for testing tactile allodynia using von Frey fibers.

Mice were tested before bacterial infection and at post-infection days PIDs 7, 14, 21, and Three different types of behavior were considered as positive responses to filament stimulation: 1 sharp retraction of the abdomen; 2 immediate licking or scratching of the area of filament stimulation; or 3 jumping. Figure 3. Tactile allodynia induced by UPEC bacteria. Referred visceral hyperalgesia was measured as responses to mechanical stimulation of the pelvic region using von Frey filaments of five calibrated forces.

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The percent response at each PID was calculated as total responses to all fibers relative to baseline responses. The prostatite una settimana di cipro y described for bacterial preparation and instillation draw upon a large body of literature on UPEC models in female urinary tract infection 7, The model has wide applicability for studying pathogenesis, testing potential vaccine candidates and mechanisms of immune modulation.

The ability to follow pain behavior in a quantifiable manner allows for the study of infection-induced pain pathogenesis and potentially as a preclinical model for testing pain therapeutics. There are several critical steps that determine the success of the mouse infection model.

The prostatite una settimana di cipro y culture method with shaking and static cultures is performed for optimal expression of pili that are known to be important for UPEC attachment to epithelial cells. It represents a critical step for successful organ colonization by UPEC. Other species or strains of bacteria potentially grow at different rates and standardization would be important to derive the appropriate O.

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Tactile allodynia in mice is a consequence of the underlying visceral pathology and as such is characterized by exquisite host strain specificity. Thus the host genetic background is important in the development of tactile allodynia.

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This is a sample clip. If you're new to JoVE sign up and start your free prostatite una settimana di cipro y today to watch the full video! If your institution has an existing subscription, log in or sign up to access this video. Immunology and Infection. Bacteria Preparation for Mouse Inoculation The following must be done under aseptic conditions. Take one 17 x mm polypropylene tubes with caps and add 3 ml of fresh Luria broth LB media. Using autoclaved tips, take some frozen bacteria glycerol stock of strain CP1 2 and transfer a small quantity of the culture into the tube containing the LB media.

Replace the tube cap so that oxygen is still able to enter the tube - the culture needs to grow under aerobic conditions. Once centrifuge has reached final temperature, transfer each 40 ml culture into a 40 ml Nalgene centrifuge tube. Weigh tubes to balance centrifuge - adjust volume with LB media as needed.

Spin tubes at 6, rpm for 20 min. Carefully remove supernatant and gently suspend bacterial pellet in 40 ml sterile PBS.

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The penis of the mouse is extruded by gentle pressure and liberal amounts of see more on cotton swabs is used for lubrication of the entrance to the penile prostatite una settimana di cipro y. Mice are placed back in their cages and monitored for the next 24 hr.